FORMACIÓN DE HOMOCARIOCITOS HEPÁTICOS

FORMACIÓN DE HOMOCARIOCITOS HEPÁTICOS

FORMACIÓN DE HOMOCARIOCITOS HEPÁTICOS  PRODUCIDOS CON POLIETILENGLICOL.

  1. AUSENCIA DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO. ASPECTO HISTOLÓGICO PRODUCIDO POR LA FUSIÓN CELULAR.

 JORGE GONZÁLEZ RAMÍREZ, ANGELINA NÚÑEZ,

 ERNESTO GUERRERO PADILLA Y TERESA MARTÍNEZ.

 DEPARTAMENTO DE CITOLOGÍA. INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS.

 UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO (UNAM).

 04510 MÉXICO D. F.

 BOL. ESTUD. MÉD. BIOL., MÉX., SUPLEMENTO VOL. 32 : 219-227, 1983.

 INTRODUCCIÓN.

 DESDE EL  AISLAMIENTO DE CÉLULAS HÍBRIDAS HECHO POR BARSKI Y COLS. (1), LA BIBLIOGRAFÍA ACERCA DE DIVERSOS ASPECTOS DE LA FUSIÓN CELULAR HA SIDO MUY GRANDE, AFORTUNADAMENTE PODEMOS SEÑALAR COMO FUENTES DE REVISIÓN GENERAL SOBRE ESTE TEMA LOS TRABAJOS DE HARRIS (14), BARSKI (2), EPHRUSSI (10) Y EL DE RINGERTZ Y SAVAGE (18).

 LA FUSIÓN CELULAR USANDO POLIETILENGLICOL (PEG) FUE DEMOSTRADA POR BONNET Y ERIKSSON (3); CONSTABEL Y KAO (6); KAO Y MICHAULUK (15); Y PONTECORVO (17). ESTA TÉCNICA RESULTO TAN BUENA E INÓCUA  QUE HA LLEGADO A SER UNA DE LAS MEJORES TÉCNICAS DE RUTINA ACTUALMENTE EN USO PARA LA FUSIÓN CELULAR.

 POR LO QUE RESPECTA AL COMPORTAMIENTO DEL HÍBRIDO SE HA SEÑALADO QUE EN HETEREOCARIOCITOS LA EXPRESIÓN FENOTÍPICA PUEDE SER DE COEXPRESIÓN COMO LO HAN SEÑALADO WATKINS Y GRACE (23), PARA CÉLULAS DE RATÓN FUSIONADAS CON CÉLULAS HUMANAS Y EN LAS CUALES HAY ANTÍGENOS DE AMBAS CÉLULAS; CARLSON Y COLS. (5) TAMBIÉN SEÑALARON LA COEXPRESIÓN PARA LA MIOSINA DE CÉLULAS DE POLLO Y RATA.  EN OTROS HETEROCARIOCITOS SE EXTINGUIERON ALGUNAS DE LAS PROPIEDADES DE DIFERENCIACIÓN COMO LO SEÑALAN GORDON Y COHN (13), EN HÍBRIDOS DE MACRÓFAGOS Y MELANOCITOS DE RATÓN EN LOS CUALES DESAPARECIÓ LA PROPIEDAD DE ACTUAR COMO MACRÓFAGOS.

  BRUMBAUGH Y SCHAL (4) DESCRIBEN LA RESTAURACIÓN DE SÍNTESIS DE PIGMENTO EN MELACONOCITOS AMELÁNICOS DESPUÉS DE LA FUSIÓN CON ERITROCITOS DE EMBRIÓN DE POLLO, DATO INTERESANTE YA QUE EN ESTE CASO SE TRATABA DE LA AUSENCIA GENÉTICA DE TAL SÍNTESIS, O SEA QUE SE OBTUVO UNA COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA. EN EL HOMBRE TAL COMPLEMENTACIÓN HA SIDO DESCRITA POR DE WEERD-KASTELEIN Y COLS. (7, 8) QUIENES LOGRARON, EN HÍBRIDOS DE FIBROBLASTOS DE  XERODERMA PIGMENTOSUM  Y FIBROBLASTOS SANOS, LA RESTAURACIÓN EN LA REPARACIÓN DE ADN EXPUESTO A RADIACIÓN ULTRAVIOLETA.  TAMBIÉN EN EL HOMBRE, GALJAARD Y COLS. (11) LOGRARON COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA EN LA ENFERMEDAD DE TAY-SACHS (FALTA DE HEXOSAMINIDASA A) Y EN LA ENFERMEDAD DE SANDHOFF (FALTA DE HEXOSAMINIDASA A Y B).

 EN 1975 KEIGHTLEY R. G. Y COLS. (16) DESCRIBIERON LA CORRECCIÓN DE UNA INMUNODEFICIENCIA COMBINADA EN UN NIÑO CON DEFICIENCIA DE ADENOSINA DEAMINASA POR MEDIO DE TRANSPLANTE DE HÍGADO FETAL. EN ESTE CASO NO HUBO RECHAZO DE INJERTO, LO CUAL PUEDE EXPLICARSE POR EL BAJÍSIMO NIVEL QUE EN DICHO PACIENTE TENIAN TODOS LOS MECANISMOS INMUNITARIOS. POR LO QUE RESPECTA A LA FUSIÓN DE CÉLULAS HEPÁTICAS, GARCÍA-SÁNCHEZ (12) SEÑALA LA FUSIÓN  IN VITRO  DE CÉLULAS HEPÁTICAS SANAS DE RATA CON CÉLULAS DEL HÍGADO, TAMBIÉN SANAS, DE OTRA RATA DONADORA; LA FUSIÓN SE REALIZÓ CON PEG. EN ESTE TRABAJO SE MENCIONA LA GRAN UTILIDAD QUE ACARREARÍA LA POSIBLE COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA AL SER APLICADA DICHA TÉCNICA EN EL HOMBRE.

 LA REACCIÓN DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO E INMUNITARIO HA SIDO DESCRITA POR NUMEROSOS AUTORES. SHELL (22) DA BUENAS DESCRIPCIONES Y LA BIBLIOGRAFÍA PERTINENTE.

 EL OBJETIVO DE ESTE TRABAJO FUE EL DE PONER A PRUEBA LA POSIBILIDAD DE QUE EN LA RATA LAS CÉLULAS HÍBRIDAS HEPÁTICAS PRODUCIDAS POR LA FUSIÓN CON POLIETILENGLICOL DE CÉLULAS HEPÁTICAS AISLADAS E INYECTADAS AL HÍGADO DE UNA RATA RECEPTORA, NO DESPERTASEN UNA REACCIÓN HISTOPATOLÓGICA DE RECHAZO COMO SUCEDE HABITUALMENTE AL INYECTAR CÉLULAS HEPÁTICAS SIN TRATAMIENTO CON PEG.

 MATERIALES Y MÉTODOS.

 SE EMPLEARON RATAS WISTAR ENTRE 3 Y 4 MESES DE EDAD, DE 300 A 400GRAMOS DE PESO Y SIN IMPORTAR SEXO. SE UTILIZARON 40 RATAS, DE LAS CUALES 30 SE TRATARON EXPERIMENTALMENTE Y 10 FUERON TESTIGOS. PARA AISLAR LAS CÉLULAS HEPÁTICAS SE UTILIZÓ EL MÉTODO DE SEGLEN (19, 20, 21), MODIFICADO POR NOSOTROS DE LA SIGUIENTE MANERA :

 SE ANESTESIÓ LA RATA CON ÉTER Y PROCEDIENDO ASÉPTICAMENTE SE ABRIÓ LA CAVIDAD ABDOMINAL  ADMINISTRANDOSE SOLUCIÓN NÚMERO UNO DE SEGLEN (SIN CALCIO) POR VENOCLISIS A TRAVÉS DE LA PORTA, LIGANDOSE LA VENA CAVA INFERIOR DE MANERA QUE EL LÍQUIDO SALIERA CLARO Y EL COLOR DEL HÍGADO SE VOLVIERA CLARO. SE PRINCIPIÓ A PERFUNDIR COLAGENASA (LABORATORIOS GIBCO) EN SOLUCIÓN AMORTIGUADORA MÁS CALCIO A UNA CONCENTRACIÓN FINAL DE 0.5%. SE PERFUNDIERON 50 ML. DE ESTA SOLUCIÓN RECICLÁNDOLA Y CAMBIÁNDOLA POR SOLUCIÓN FRESCA CUANDO SU COLOR SE TORNABA OBSCURO. EL TIEMPO DE ACCIÓN DE LA COLAGENASA FUE DE 15 MINUTOS. POSTERIORMENTE SE PERFUNDIÓ CON MEDIO BASAL DE EAGLE (9) PARA SUSPENDER LA ACCIÓN DE LA COLAGENASA. EL HÍGADO SE COLOCÓ EN UNA CAJA DE PETRI DONDE SE FRAGMENTÓ EN MEDIO DE EAGLE PARA LIBERAR LAS CÉLULAS HEPÁTICAS QUE SE ENCONTRABAN PRÁCTICAMENTE SUELTAS Y SOLO CONTENIDAS POR LA CÁPSULA DE GLISON. LA SUSPENSIÓN CELULAR ASÍ OBTENIDA SE FILTRÓ POR UNA GASA ESTÉRIL Y SE CENTRIFUGÓ A 800 RPM. DURANTE 5 MINUTOS EN MEDIO DE EAGLE. EL BOTÓN CELULAR SE TRATÓ CON POLIETILENGLICOL (PEG) DE PESO MOLECULAR 6,000 DILUIDO 1:1 EN SOLUCIÓN SALINA, LA ACCIÓN DEL PEG FUE DE 40 SEGUNDOS, LAVANDOSE INMEDIATAMENTE DESPUÉS CON MEDIO DE EAGLE Y VOLVIENDOSE A CENTRIFUGAR A 800 RPM. DURANTE 5 MINUTOS.

 EL BOTÓN SE SUSPENDIÓ EN 5 GOTAS DE MEDIO DE EAGLE Y SE INYECTARON 0.25 ML. EN VARIOS SITIOS DEL HÍGADO DE LA RATA RECEPTORA. SE SACRIFICARÓN LAS RATAS CADA SEMANA HASTA DOS MESES DESPUÉS DE LA INYECCIÓN INICIAL. EL LOTE DE LAS RATAS TESTIGO SE MANEJÓ IGUAL QUE EL EXPERIMENTAL, EXCLUYENDO EL TRATAMIENTO CON PEG.

 LOS HÍGADOS DE LAS RATAS EXPERIMENTALES Y TESTIGOS SE FIJARON EN FORMOL NEUTRO AL 10% Y DESPUÉS DE 48 HORAS SE INCLUYERON EN PARAFINA. SE OBTUVIERON CORTES DE 3 MICRAS Y SE TIÑERON CON HEMATOXILINA-EOSINA. SE ESTUDIARON APROXIMADAMENTE 50 LAMINILLAS DE CADA HÍGADO Y LAS ZONAS ADECUADAS SE FOTOGRAFIARON POR MEDIO DEL ULTRAPHOT DE ZEISS.

 RESULTADOS.

 EN LAS RATAS TESTIGO, EL EXAMEN MICROSCÓPICO MOSTRÓ QUE, EN LA PRIMERA SEMANA, LAS CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS ERAN RÁPIDAMENTE RODEADAS POR CÉLULAS DE KUPFFER QUE INICIABAN LA DESTRUCCIÓN DE CÉLULAS EXTRAÑAS, ASÍ MISMO SE OBSERVÓ INFILTRADO LINFOCITARIO QUE AUMENTÓ EN LAS SEMANAS SUCESIVAS. SE CONSTITUYERON PUES LOS NÓDULOS DE RECHAZO CLÁSICAMENTE CONOCIDOS. EN LAS FIGURAS 1 Y 2 ESTOS FENÓMENOS SON PERFECTAMENTE VISIBLES. HAY QUE SEÑALAR QUE EL COMPORTAMIENTO CLÍNICO DE LAS RATAS TESTIGO FUE COMPLETAMENTE NORMAL.

 EN EL GRUPO EXPERIMENTAL ENCONTRAMOS QUE EN ALGUNAS OCASIONES HABÍA GRUPOS CELULARES DE CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS QUE AUNQUE FUSIONADAS ENTRE SÍ, NO LO HABÍAN HECHO CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR, POR LO CUAL MOSTRARON UN ASPECTO HISTOPATOLÓGICO EQUIVALENTE AL SEÑALADO PARA LOS NÓDULOS DE RECHAZO EN LOS TESTIGOS COMO SE MUESTRA EN LA FIGURA 3.

 SIN EMBARGO, EN LA INMENSA MAYORÍA DE LAS LAMINILLAS EXPERIMENTALES OBSERVADAS PUDIMOS CONSTATAR LA AUSENCIA DE NÓDULOS DE RECHAZO Y LA FUSIÓN DE LAS CÉLULAS INYECTADAS CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR COMO SE MUESTRA EN LA FIGURA 4, 5 Y 6 CAUSANDO UNA ENORME FUSIÓN CON LAS COLUMNAS HEPÁTICAS, LLEGANDOSE AL GRADO DE PRODUCIR ENORMES SINCICIOS COMO SE APRECIA EN FORMA MUY CLARA EN LA FIGURA 6 EN LA QUE LOS LÍMITES CELULARES Y LAS COLUMNAS HEPÁTICAS HAN DESAPARECIDO CEDIENDO SU LUGAR A GRANDES SINCICIOS EN LOS CUALES SE PUEDEN APRECIAR NÚCLEOS CON DISTINTAS AFINIDADES TINTORIALES Y TAMAÑOS DIVERSOS.

 FUE FRECUENTE EL OBSERVAR ESPACIOS PORTA LIGERAMENTE DILATADOS Y AÚN ROTOS COMO SE MUESTRA EN LA FIGURA 4. LOS SINUSOIDES MOSTRARON CON FRECUENCIA ASPECTOS DE PEQUEÑAS GRIETAS EN EL PARÉNQUIMA CON CÉLULAS DE KUPFFER EN SUS PAREDES COMO SE VE EN LA FIGURA 5. FUE TAMBIÉN FRECUENTE LA CONGESTIÓN SINUSOIDAL EN DIVERSOS SITIOS DEL PARÉNQUIMA HEPÁTICO. LAS CÉLULAS DEL SINCICIO CONSERVARON ASPECTOS NORMALES TANTO EN EL NÚCLEO COMO EN EL CITOPLASMA. EL COMPORTAMIENTO CLÍNICO DE LAS RATAS EXPERIMENTALES FUE COMPLETAMENTE IGUAL  AL DE LOS TESTIGOS Y A LA DE LAS NORMALES, SIN TRATAMIENTO ALGUNO.

 DISCUSIÓN.

 LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN ESTOS EXPERIMENTOS NOS PERMITEN ASEGURAR QUE EN LA RATA, SE PUEDE EVITAR EL RECHAZO HISTOPATOLÓGICO QUE NORMALMENTE SE OBSERVA AL TRASPLANTAR ÓRGANOS COMPLETOS, PORCIONES DE ELLOS O CÉLULAS AISLADAS DE UN ANIMAL A OTRO DE LA MISMA ESPECIE (22). ESTA AUSENCIA DE RECHAZO SE DEBE A LA FORMACIÓN DE HOMOCARIOCITOS HEPÁTICOS, HÍBRIDOS SINCICIALES PRODUCIDOS POR LA ACCIÓN FUSIONANTE DEL PEG (17).

 EL TEMOR DE QUE EL HÍBRIDO PRODUJESE UN MOSAICO ANTIGÉNICO EN LA MEMBRANA CELULAR Y QUE CONDUJESE A SU DESTRUCCIÓN DESAPARECIÓ COMPLETAMENTE YA QUE A LOS DOS MESES DE EXPERIMENTACIÓN, EN LAS RATAS, EL HÍGADO NUNCA MOSTRÓ SEÑALES DE NINGÚN TIPO DE RECHAZO. EXPERIMENTOS RECIENTES AÚN NO PUBLICADOS POR NOSOTROS Y EN LOS CUALES HEMOS ADICIONADO AL PEG UNA SOLUCIÓN AL 5% DE DIMETILSULFÓXIDO (DMSO) HAN INCREMENTADO AÚN MÁS LA FUSIÓN CELULAR.

 CABE SEÑALAR QUE EN OCASIONES SE OBSERVARON GRUPOS CELULARES TRATADOS CON PEG E INYECTADOS EN LOS HÍGADOS RECEPTORES QUE SE FUSIONABAN ENTRE SÍ Y NO CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR LO QUE OBVIAMENTE LES CONVERTÍA EN CÉLULAS EXTRAÑAS QUE SUFRIAN EL ATAQUE INMEDIATO DE LOS MACRÓFAGOS, LA ULTERIOR INFILTRACIÓN LINFOCITARIA Y SU TRANSFORMACIÓN EN NÓDULOS DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO.

AFORTUNADAMENTE EN NUESTROS EXPERIMENTOS TAL SUCESO FUE RARO Y ESPERAMOS REDUCIRLO AÚN MÁS CON LA MENCIONADA ADICIÓN DE DMSO AL AGENTE FUSIONANTE.

 LAS CARACTERÍSTICAS DEL NÚCLEO, NUCLEOLO Y CITOPLASMA DE LAS CÉLULAS SINCICIALES SON COMPLETAMENTE NORMALES. SEÑALAREMOS QUE EXISTEN NÚCLEOS DENTRO DEL SINCICIO CON DIFERENTES TAMAÑOS Y AFINIDAD TINTORIAL LO QUE NO SE OBSERVA EN EL HÍGADO NORMAL. EL TAMAÑO VARIABLE DE LOS NÚCLEOS SE PUEDE EXPLICAR POR LA FINURA DE LOS CORTES (3 MICRAS) Y LA SECCIÓN DE LOS NÚCLEOS A DIVERSAS DISTANCIAS DE SUS POLOS, LO QUE DARÍA ESTA IMPRESIÓN DE VARIEDAD EN EL TAMAÑO.

 EN CAMBIO LA DISTINTA AFINIDAD TINTORIAL NOS ESTÁ PROBABLEMENTE SEÑALANDO LA DIVERSIDAD DEL ORÍGEN DE LOS NÚCLEOS. LA POSIBILIDAD DE QUE ALGUNOS DE ESTOS NÚCLEOS ESTÉN EN PROCESO DE PICNOSIS PUDIERA ARGUMENTARSE, AUNQUE NOSOTROS LA RECHAZAMOS YA QUE A LOS DOS MESES DE EXPERIMENTACIÓN NUNCA VIMOS ESTÉ TIPO DE DEGENERACIÓN EN NUESTRAS PREPARACIONES.

 LAS DILATACIONES Y ROTURAS EN LOS ESPACIOS PORTA Y ZONAS ALEDAÑAS SE COMPRENDEN FÁCILMENTE PENSANDO EN EL FUERTE AUMENTO DE PRESIÓN QUE SE GENERA CON LA INYECCIÓN DE GRANDES MASAS DE CÉLULAS HEPÁTICAS, ASÍ COMO POR EL TRAUMA MECÁNICO PRODUCIDO POR LA AGUJA. LA CONGESTIÓN SINUSOIDAL TAMBIÉN TIENE EXPLICACIÓN A TRAVÉS DEL INCREMENTO DE PRESIÓN PRODUCIDO POR LA INYECCIÓN.

 EL IMPACTO QUE ESTAS INVESTIGACIONES TENDRÁN EN EL FUTURO INMEDIATO SERÁ MUY GRANDE YA QUE SI BIEN SOLO HEMOS DADO EL PRIMER PASO AL DEMOSTRAR LA AUSENCIA DE RECHAZO, EN TRABAJOS ULTERIORES SE ESTUDIARÁN SUS POSIBLES IMPLICACIONES EN LA COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA QUE PODRÁ DOTAR DE GENES FALTANTES A  AQUELLOS ORGANISMOS QUE CONGÉNITAMENTE NO LOS POSEAN Y QUE PADEZCAN DE ENFERMEDADES QUE EN LA MAYORÍA DE LOS CASOS SUELEN SER MORTALES.

 LA COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA YA HA SIDO DEMOSTRADA EN CULTIVO DE TEJIDOS POR BRUMBAUGH Y SCHAL (4), EN CÉLULAS DE AVES, Y POR DE WEERD-KASTELEIN Y COLS. (7, 8) PARA FIBROBLASTOS HUMANOS EN XERODERMA PIGMENTOSUM  Y POR GALJAARD Y COLS. (11) EN LA ENFERMEDAD DE TAY-SACHS.

 EN EL CASO DE APLICACIÓN HUMANA, CABE CITAR A KEIGHTLEY Y COLS. (16) QUIENES CORRIGIERON UNA INMUNODEFICIENCIA COMBINADA EN UN NIÑO POR MEDIO DE TRANSPLANTE DE HÍGADO FETAL. EN ESTE TRATAMIENTO ES OBVIO SEÑALAR QUE LA AUSENCIA DE RECHAZO SE DEBIÓ EXACTAMENTE AL BAJÍSIMO NIVEL DE DEFENSA, TANTOINMUNOLÓGICA COMO CELULAR QUE EL PACIENTE TENÍA.

 NUESTRO PROCEDIMIENTO, EN CAMBIO, ENCIERRA LA POSIBILIDAD DE TRATAMIENTO NO SOLO DE LAS ENFERMEDADES MENCIONADAS SINO DE UN SINNÚMERO DE PADECIMIENTOS QUE COMO LA HEMOFILIA HAN CONSTITUIDO AZOTES FATALES PARA MÚLTIPLES PERSONAS Y SUS DESCENDIENTES, ASÍ COMO EL POSIBLE TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES COMO LA DIABETES EN LA CUAL YA NO SE FORMA INSULINA EN LOS ISLOTES DE LANGERHANS, LO QUE PODRÍA NUEVAMENTE REALIZARSE AL ADQUIRIR DICHAS CÉLULAS GENOMAS NUEVOS QUE SI FUERAN CAPACES DE GENERARLA. EL TRATAMIENTO DE MÚLTIPLES ENFERMEDADES GLANDULARES TAMBIÉN ENCONTRARÍA AQUÍ UNA OBVIA APLICACIÓN.

 LA DECADENCIA GLANDULAR Y DE OTROS TEJIDOS EN LA VEJEZ ENCONTRARÍAN ALIVIO AL INYECTARSE LAS CÉLULAS ADECUADAS, QUE DONARÍAN GENOMAS SANOS Y JOVENES, QUE PUDIERAN COMPLEMENTAR A AQUELLOS QUE YA SE ENCUENTRAN EN DECADENCIA.

 EL PRIMER PASO ESTÁ DADO AL DEMOSTRAR EN LA RATA, LA AUSENCIA DE RECHAZO. SIN EMBARGO, ANTES DE INICIAR LA EXPERIMENTACIÓN EN EL HOMBRE, QUE SERÁ EL ÚNICO CAMINO PARA DEMOSTRAR LA POSIBLE COMPLEMENTACIÓN GENÉTICA, YA QUE LOS RESULTADOS EN ANIMALES, SI BIEN SON DE ENORME UTILIDAD, NO SON TOTALMENTE EXTRAPOLABLES AL HOMBRE, ES NECESARIO PROBAR QUE LA AUSENCIA DE RECHAZO HA SIDO POR FIN ALCANZADA.

RESUMEN:

 SE UTILIZARON RATAS WISTAR DE TRES A CUATRO MESES DE EDAD CON UN PESO DE 300 A 400 G SIN IMPORTAR EL SEXO. PARA OBTENER CÉLULAS HEPÁTICAS AISLADAS SE PERFUNDIÓ EL HIGADO DE LA RATA, PRIMERO CON UNA SOLUCIÓN SALINA LIBRE DE CALCIO Y CON HEPARINA, CUANDO EL LÍQUIDO DRENADO ESTUVO LIBRE DE SANGRE SE PERFUNDIÓ CON COLAGENASA AL 0.5% RECICLANDOLA DURANTE 15 MINUTOS, DESPUÉS SE PERFUNDIÓ CON MEDIO BASAL DE EAGLE (9) PARA SUSPENDER LA ACCIÓN DE LA COLAGENASA. EL ÓRGANO SE EXTRAJÓ Y SE FRAGMENTÓ EN UNA CAJA DE PETRI OBTENIENDOSE UNA SUSPENSIÓN CELULAR MUY RICA EN CÉLULAS LIBRES LAS CUALES DESPUÉS DE LAVADAS Y CENTRIFUGADAS SE RESUSPENDIERON EN 5 GOTAS DE MEDIO DE EAGLE, Y SE INYECTARON A LAS RATAS TESTIGO 0.25 ML. INTRAHEPÁTICOS DE ESTA SUSPENSIÓN CELULAR. EN EL CASO DE LAS RATAS EXPERIMENTALES SE TRATÓ DE BOTÓN CELULAR CON POLIETILENGLICOL DE PESO MOLECULAR 6,000 DURANTE 40 SEGUNDOS, SE LAVO CON MEDIO DE EAGLE Y DESPUÉS DE CENTRIFUGAR SE INYECTÓ 0.25 ML. DE SUSPENSIÓN CELULAR EN EL HÍGADO. LOS TESTIGOS Y LAS RATAS EXPERIMENTALES SE SACRIFICARON A TIEMPOS VARIABLES, SIENDO EL MÁXIMO HASTA 2 MESES DESPUÉS DE LA INYECCIÓN.

 EL HIGADO DE LOS ANIMALES SACRIFICADOS SE FIJÓ EN FORMOL, SE INCLUYÓ EN PARAFINA, SE SECCIONÓ Y SE TIÑÓ CON HEMATOXILINA Y EOSINA PARA SU ESTUDIO HISTOPATOLÓGICO. EN LAS RATAS TESTIGO SE OBSERVARON LOS NÓDULOS DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO CARACTERÍSTICO. EN CAMBIO EN LAS RATAS EXPERIMENTALES NO HUBO RECHAZO Y SI LA FORMACIÓN DE GRANDES SINCICIOS DE CÉLULAS HEPÁTICAS CONSTITUIDAS POR CÉLULAS DEL RECEPTOR Y LAS CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS. ESTOS SINCICIOS SE OBSERVARON FUNDAMENTALMENTE ALREDEDOR DE LAS ZONAS INYECTADAS Y EN TODAS LAS RATAS EXPERIMENTALES EN CUALQUIERA DE LOS TIEMPOS EN QUE FUERON SACRIFICADAS. EL COMPORTAMIENTO CLÍNICO DE LAS RATAS TESTIGO Y LAS EXPERIMENTALES FUE COMPLETAMENTE NORMAL DURANTE TODO EL PERIODO DE OBSERVACIÓN.

 LA IMPORTANCIA DE ESTE TRABAJO RADICA NO SOLO EN LA SUPRESIÓN DEL RECHAZO HISTOPATOLÓGICO, SINO EN LA POSIBLE ADQUISICIÓN DE GENOMAS COMPLETOS DE CÉLULAS DE OTRO ANIMAL. LO QUE PLANTEA LA POSIBILIDAD DE OBTENER GENES QUE NO EXISTAN DESDE EL NACIMIENTO Y QUE SEAN CAUSA DE DIVERSAS ENFERMEDADES CONGÉNITAS DE TIPO GENÉTICO, ASÍ COMO LA  ADQUISICIÓN DE GENOMAS JÓVENES QUE PUEDAN CORREGIR DEFECTOS METABÓLICOS DE GENOMAS SENILES. SE SEÑALA SU POSIBLE UTILIZACIÓN EN CASOS HUMANOS COMO POR EJEMPLO EN LA HEMOFILIA, LA DIABETES Y EN LA SENILIDAD.

 SUMMARY.

 WISTAR RATS OF BOTH SEXES, 3 TO 4 MONTHS OLD, WEIGHING 300 TO 400 GWERE INJECTED IN THE LIVER WITH ISOLATED LIVER CELLS TREATED WHIT PEG AND OBTAINED FROM ANOTHER RAT. THE LIVERS WERE STUDIED AFTER A PERIOD OF TWO MONTHS.

 THE ABSENCE OF HISTOPATHOLOGICAL REJECTION WAS DEMONSTRATED. THE DONOR CELLS FORMED A HUGE SYNCYTIUM BY FUSION WITH RECEPTOR’S PARENQUIMA. THE CLINICAL BEHAVIOR OF THE RATS WAS ABSOLUTELY NORMAL. THE POSSIBILITIES OF APPLICATION TO HUMAN BEINGS AS A THERAPEUTIC ATTEMPT IN CONGENITAL DISEASES (HEMOPHILIA) AND THOSE PRODUCED BY DECADENCE OF A GENOME (DIABETES, SENILITY) ARE POINTED OUT.

 FIGURAS.

  FIG. 1.-   HÍGADO DE RATA TESTIGO. UNA SEMANA DESPUÉS DE LA INYECCIÓN INICIAL DE CÉLULAS NO TRATADAS CON PEG. LA FLECHA MUESTRA EL NÓDULO DE RECHAZO. SE OBSERVARON EN ÉL A LAS CÉLULAS DE KUPFFER, ASÍ COMO INFILTRACIÓN LINFOCITARIA. LAS COLUMNAS HEPÁTICAS SON MUY NÍTIDAS Y BIEN DELIMITADAS. (160 X, TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

  FIG. 2.-   HÍGADO DE RATA TESTIGO. UNA SEMANA DESPUÉS DE LA INYECCIÓN DE CÉLULAS NO TRATADAS CON PEG. NÓDULO DE RECHAZO HISTOPATOLÓGICO. SE PUEDEN OBSERVAR NUMEROSAS CÉLULAS DE KUPFFER DESINTEGRANDO A LAS CÉLULAS HEPÁTICAS INYECTADAS. LAS CÉLULAS HEPÁTICAS MUESTRAN LÍMITES NÍTIDOS. (400 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 FIG. 3.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. UNA SEMANA DESPUÉS DE LA INYECCIÓN DE CÉLULAS TRATADAS CON PEG. DICHAS CÉLULAS SE FUSIONARON ENTRE SÍ Y NO CON EL PARÉNQUIMA RECEPTOR. LA FLECHA SEÑALA A DOS CÉLULAS QUE ESTAN SIENDO ATACADAS POR CÉLULAS DE KUPFFER. POR ABAJO Y A LA DERECHA DE ELLAS SE OBSERVA UNA INFILTRACIÓN LINFOCITARIA. HAY CONGESTIÓN SINUSOIDAL. (400 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 FIG. 4.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. DOS SEMANAS DESPUÉS DE LA INYECCIÓN INICIAL DE CÉLULAS TRATADAS CON PEG. SE OBSERVA LA FUSIÓN DE COLUMNAS HEPÁTICAS. LOS LÍMITES CELULARES SE HAN BORRADO. EL ESPACIO PORTA SE VE DILATADO Y ROTO. (160 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 FIG. 5.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. CUATRO SEMANAS DESPUÉS DE LA INYECCIÓN. LAS COLUMNAS HEPÁTICAS SE HAN FUSIONADO TOTALMENTE. SE OBSERVAN ESPACIOS SINUSOIDALES COMO GRIETAS EN EL TEJIDO, BORDEADOS POR CÉLULAS DE KUPFFER. (250 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA-EOSINA).

 FIG. 6.-   HÍGADO DE RATA EXPERIMENTAL. OCHO  SEMANAS DESPUÉS LAS HEPÁTICAS CONSTITUYERON UN GRAN SINCICIO EN EL QUE SE OBSERVAN NÚCLEOS DE DISTINTOS TAMAÑOS Y AFINIDADES TINTORIALES. LA ARQUITECTURA DE COLUMNAS HEPÁTICAS HA DESAPARECIDO COMPLETAMENTE. (400 X. TINCIÓN CON HEMATOXILINA- EOSINA).

 REFERENCIAS.

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